【类型】期刊

【作者】韩增强，张文萍（河南小秦岭国家级自然保护区管理局；三门峡市涧河管理处）

【作者单位】河南小秦岭国家级自然保护区管理局；三门峡市涧河管理处

【刊名】河南林业科技

【关键词】 松材线虫；形态鉴定；初探

【ISSN号】1003-2630

【页码】P32，54

【年份】2019

【期号】第2期

【摘要】松材线虫病,又称松树枯萎病,是由松材线虫感染松树并导致该树在极短时间内迅速死亡的一种森林生物灾害。此病主要危害松属植物,在河南省主要危害油松、华山松、白皮松、雪松和日本落叶松。松树一旦感病即很难治愈,最快的仅在40多天内即可枯死,因此又被称为松树的"癌症"。目前,世界上已有40多个国家和多个组织都将其列为检疫对象。对松材线虫的鉴定目前除了对感病松树进行外观和生物学判断以外,主要采用对疑似感病松树进行取样,然后对线虫进行分离,在显微镜下进行鉴定的方法进行

【全文】 文献传递

松材线虫鉴定技术初探

韩增强，张文萍

（1.河南小秦岭国家级自然保护区管理局，河南 三门峡 472500 ；2. 三门峡市涧河管理处，河南 三门峡 472000）

摘 要：松材线虫病，又称松树枯萎病，是由松材线虫感染松树并导致该树在极短时间内迅速死亡的一种森林生物灾害。此病主要危害松属植物，在河南省主要危害油松、华山松、白皮松、雪松和日本落叶松。松树一旦感病即很难治愈，最快的仅在40多天内即可枯死，因此又被称为松树的 “癌症”。目前，世界上已有40多个国家和多个组织都将其列为检疫对象。对松材线虫的鉴定目前除了对感病松树进行外观和生物学判断以外，主要采用对疑似感病松树进行取样，然后对线虫进行分离，在显微镜下进行鉴定的方法进行。

关键词：松材线虫；形态鉴定；初探

1982年在南京中山陵的黑松上首次发现松材线虫病，初步发生面积约为200 hm2，发生株数仅200多株。据国家林业局网站发布，目前该病已在全国18个省、直辖市，约588个县级行政区发生，发生面积64.7万hm2，有向西、北蔓延的趋势，并且已蔓延至多个国家级风景名胜区。另外，传播媒介除松墨天牛以外，还发现了云杉花墨天牛等新的传播媒介，危害对象由过去的马尾松、黑松扩大到油松、红松、落叶松等松树种类，直接威胁我国的松林资源安全。防治松材线虫病已成为目前我国林业有害生物防治的一项重中之重的工作，对松材线虫病的鉴定也显得更加重要。作者长期以来一直从事对松材线虫病的鉴定工作，在实际工作中积累下了丰富的经验，着重从对松材线虫病在形态上的鉴定进行探讨，提出了在显微镜下进行鉴定的步骤和方法。

1 通过观察松材线虫形态进行初步鉴别

1.1 观察中食道球形状和口针情况

松材线虫的雌雄虫均呈蠕虫形，虫体前端有明显特点。虫体呈细长状，唇区高，缢缩显著，前缘圆，口针细长，在基部部分有膨大，中食道球卵圆形，约有体宽的2/3以上，瓣膜比较明显清晰。

实践中，因为幼虫虫体前部虽然和成虫相似，但其后部在显微镜下呈现暗色，难以看清其虫体结构，不易分清雌雄，所以一般在鉴定过程中，要找到成虫进行鉴别，幼虫一般不作为鉴定和判别的依据。找到成虫后，发现以上虫体特征后，才可进一步进行鉴别。

1.2 观察雄成虫的交合刺形态

松材线虫雄成虫的交合刺大，成弓状，成对，喙突显著，远端膨大如盘状，尾部圆锥形，向腹部弯曲似鸟爪，末端被一卵形交合伞包裹。

实践中，雄成虫交合刺的形态在显微镜下比较明显，也容易鉴别，但是，在找到雄成虫的特征后，依然不能做出判断，要继续观察，找到雌成虫后，再进行下一步鉴别。

1.3 观察雌成虫阴门盖

松材线虫雌成虫尾部形态为指形，阴门开口于虫体后部约73%处，有较宽的阴门盖，观察阴门盖和尾部形态，比较容易进行鉴别。

但是也有部分雌成虫有短的尾尖突，通常小于2 μm，在鉴别时要进行综合对比观察。

实践中，在鉴别雌成虫的形态时，如果能够熟练掌握其尾部特征，可以迅速找到松材线虫的雌成虫，如果对其尾部形态不熟悉，可通过观察其阴门盖进行鉴别。要注意，在此过程中，要把拟松材线虫和松材线虫区别开来，拟松材线虫的尾部呈圆锥状，其尾端有尾尖突，长度较松材线虫相比比较长，一般为3.5~5 μm，而松材线虫长度小于2 μm。

2 显微镜下通过形态鉴别松材线虫的缺陷

2.1 不利于在实践中进行快速检疫

由于我们在进行检疫过程中，由于大部分的松木包装板和电缆盘都是经过长途运输过来的，一般比较干燥，在经过处理后，不容易发现线虫成虫，通过形态鉴别就很难准确进行检疫，如果进行培养，至少需要7~10 d时间，很不方便，为快速检疫带来很大困难。

2.2 容易造成错检

由于雌成虫的尾尖突、尾形、雄虫的交合刺形态在种间也有部分重叠现象，所以很可能造成错检。

2.3 分子检测鉴定技术的运用

松材线虫形态学鉴定的缺陷，凸显出了分子检测技术的重要性。南京林业大学成功开发了一系列松材线虫的分子检测方法，包括SCAR标记检测方法、RFLB检测方法等。其中SCAR标记检测方法与实时PCR检测方法已在全国部分省区得到推广应用。

3 松材线虫形态鉴定方法的意义

虽然松材线虫的形态鉴定方法有一定的缺陷，但是目前，全国松材线虫疫情爆发激烈、基层森防站防治任务大、实验室条件简陋、无法进行大面积分子检测的现实情况下，仍然有较大的实用性。如果我们能够牢牢把握采样、分离、鉴定等几个环节的工作质量，基本上可以消除其缺陷，识别的准确度可达到90%以上，为准确识别、迅速反应和快速处置打下坚实的基础。

4 结论

结合作者自己的实践经验，对在显微镜下进行松材线虫形态学鉴定的方法和步骤进行了详细论述，提出了如何准确确定松材线虫病的标准，希望能对在基层工作的森防人员提供可借鉴的依据。

参考文献：

[1] 苏胜荣，陈凤毛，叶建仁. 松材线虫SCAR标记检测方法的建立与应用[J]. 黄山学院学报，2008，10（5）：57-59.

[2]李永成，赵宇翔. 关于我国松材线虫病治理工作若干问题的思考[J]. 福建林业科技，2006，32（3）：41-44.

[3] 高步衢. 森林植物检疫[M]. 北京：中国科学技术出版社，1998.

收稿日期：2019-05-15

中图分类号：S 763.1

文献标志码：C

文章编号：1003-2630（2019）02-0032-01

（责任编辑：王团荣）